P R O D U K T O I N F O R M A C I N I S L A P E L I S

Transcription

1 Immucor GTI Diagnostics, Inc. 09 Crossroads Circle, Waukesha, WI 186, JAV (USA) Telefonas: +1 (8) Gaminio dokumentus ir vertimus rasite tinklapyje P R O D U K T O I N F O R M A C I N I S L A P E L I S LIFECODES LifeScreen Deluxe (LMX) rinkinys: Luminex atrankinės patikros kokybinis tyrimas, skirtas žmogaus kilmės ŽLA I klasės IgG molekulių ir ŽLA II klasės IgG molekulių antikūnams nustatyti. Skirtas tik in vitro diagnostikai. Simbolių reikšmės Numatoma paskirtis..... Santrauka ir paaiškinimas... Procedūros principai Reagentai A. Identifikacija..... B. Įspėjimai ir atsargumo priemonės.... C. Sandėliavimo nurodymai... D. Gryninimas ar apdorojimas reikalingas ruošiantis naudoti..... E. Nestabilumo indikacijos..... Instrumentams keliami reikalavimai..... Mėginių ėmimas ir paruošimas.... TURINYS 1 Procedūra..... A. Pridedamos medžiagos..... B. Reikalingos medžiagos, kurių nėra komplekte Naudojimo nurodymai..... Kokybės kontrolė.... Rezultatai.... Procedūros apribojimai Klaidų aptikimas.... Specifinės atlikimo charakteristikos... Informacinės nuorodos SIMBOLIŲ REIKŠMĖS (produkto ženklinimo etiketės ir papildomi dokumentai) Serijos kodas Katalogo numeris Naudoti pagal datą Temperatūros apribojimai (saugojimo) Prieš naudojant atskiesti DIL Jautrumas šviesai (saugoti nuo šviesos) Turinio pakanka N tyrimams Žiūrėti instrukcijoje Paciento vardas ir pavardė NAME Identifikavimo numeris ID# Data DATE Laborantas TECH Granulė BEAD Etninė grupė ETHN Donoras DONOR Fono sureguliavimo faktorius BAF Fluorescencinio intensyvumo mediana MFI Rezultatas (žr. Rezultatai ) SCORE Interpretavima s INTRP Neigiama kontrolinė granulė CON Teigiama kontrolinė granulė (imunoglobulino G) Kraujo ėmimo data Stebėtos reikšmės IgG I klasė CLI II klasė CLII Mėginys SAMPLE BDT Observed Ranges Antigeną apdorojančių granulių skaičius Kontrolės Controls Gamintojas Biologinis pavojus Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje Atsargiai! Žr. pridedamus dokumentus 1 psl. iš 6 LC100IVDLT Rev. U

2 Granulių mišinio partijos numeris Bead Mix Lot # Įspėjimas NUMATOMA PASKIRTIS LIFECODES LifeScreen Deluxe rinkinys skirtas IgG antikūnų ŽLA I klasės ir II klasės molekulių kokybiniam nustatymui granulių imuninės analizės metodu. SANTRAUKA IR PAAIŠKINIMAS Žmogaus leukocitų antigenai (ŽLA) yra glikobaltymų sistema, imuninei sistemai tiekianti peptidus. 1, Kadangi antigenai yra labai polimorfiški, dėl nėštumo, kraujo perpylimo produktų arba persodinto transplantato atmetimo jie gali būti nukreipti prieš ŽLA molekules. Paprastai dėl alogeninės vakcinacijos apie % asmenų pasireiškia ŽLA antikūnų gamyba. Tokių ŽLA specifinių antikūnų buvimas ar nebuvimas svarbus nustatant alogeninių transplantatų gyvybingumo trukmę po persodinimo. 4 LIFECODES LifeScreen Deluxe granulės skirtos IgG antikūnams prieš ŽLA I ir II klasės antigenus nustatyti. LifeScreen Deluxe yra sudarytas iš unikalių Luminex granulių, prie kurių konjuguojami išgryninti ŽLA I klasės ir ŽLA II klasės glikobaltymai. PROCEDŪROS PRINCIPAI Alikvotinę granulių dalį leidžiama inkubuoti naudojant mažą tyrimo serumo mėginio kiekį. Įjautrintos granulės tuomet nuplaunamos, taip pašalinant neprijungtus antikūnus. Po to įpilama prieš žmogaus IgG fikoeritrinu konjuguotų antikūnų. Atlikus dar vieną inkubaciją, tyrimo mėginys yra atskiedžiamas ir analizuojamas Luminex instrumentu. Kiekvienos granulės signalo intensyvumas lyginamas su neigiamos kontrolinės granulės, kuri pridedama ruošiant granules, kad būtų galima nustatyti, ar granulė yra teigiama, ar neigiama alogeninių antikūnų prisijungimui, signalo intensyvumu. REAGENTAI A. Identifikacija 681: LMX LIFECODES LifeScreen Deluxe rinkinį sudaro penkios () sudėtinės dalys. Šių dalių pateikiamo kiekio užtenka 96 tyrimams atlikti LMXB LifeScreen Deluxe granulės (480 µl). ŽLA I klasės glikobaltymais ar ŽLA II klasės glikobaltymais konjuguotas granulių mišinys ir keturios (4) kontrolinės granulės. Laikymo buferis yra fosfatinis buferinis druskos tirpalas, kuriame yra NaCl, Tween-0, ProClin00 ir galvijo serumo albumino. JAUTRIOS ŠVIESAI. Įprastas šviesos poveikis turi trukti iki valandų ar trumpiau. Paruoštos naudoti. Laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje LMCJS konjugato koncentratas (0 µl). Fikoeritrinu konjuguotų ožkos antikūnų prieš žmogaus IgG 10 x koncentratas laikomas fosfatiniame buferiniame druskos tirpale, kuriame yra NaCl, Tween-0, natrio azido ir galvijo serumo albumino. DIL Prieš naudojant praplovimo buferį BŪTINA ATSKIESTI 1:10. JAUTRUS ŠVIESAI. Įprastas šviesos poveikis turi trukti iki valandų ar trumpiau. Laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje LMWB praplovimo buferis (10 ml). Fosfatinis buferinis druskos tirpalas, kuriame yra NaCl, Tween-0, natrio azido, galvijo serumo albumino. Paruoštas naudoti. Laikykite 8 C temperatūroje. Prieš naudojant turi nusistovėti iki kambario temperatūros (0 4 o C). Šių dalių pateikiamo kiekio užtenka šešiems (6) procesams atlikti: LMPC teigiamas kontrolinis serumas (80 µl). Šis serumas arba serumo mišinys gautas iš asmens (-ų), pademonstravusių rezus imunizaciją ŽLA antigenams. Sudėtyje yra natrio azido. Paruoštas naudoti. Laikykite 8 C temperatūroje LMNC neigiamas kontrolinis serumas (80 µl). Šis serumas arba serumo mišinys gautas iš asmens (-ų), kurie žinomi kaip neturintys antikūnų prieš ŽLA antigenus. Sudėtyje yra natrio azido. Paruoštas naudoti. Laikykite 8 C temperatūroje. B. Įspėjimai arba atsargumo priemonės 1. Skirti tik in vitro diagnostikai.. Šiame rinkinyje naudojamos žmogaus kilmės medžiagos buvo ištirtos JAV maisto ir vaistų administracijos (FDA) patvirtintais metodais. Neigiamas medžiagų tyrimo rezultatas rodo, kad tyrimo metu antikūnų prieš HBsAg, hepatito C virusą ir ŽIV-1/ nenustatyta. Vis dėlto nė vienas patikrinimo metodas negali visiškai garantuoti, kad sudėtyje nėra jokių užkrečiamųjų medžiagų. Dirbdami su šiomis medžiagomis taikykite visapuses atsargumo priemones.. Šios sistemos komponentus keičiant kitais nei pateikiami šioje sistemoje, gali būti gauti neteisingi rezultatai. 4. Kai kuriuose reagentuose yra 0,1 % natrio azido konservanto, kuris gali sureaguoti su švinu ir variu santechnikos sistemoje, sudarydamas labai sprogius metalo azidus. Šalindami medžiagas per vandentiekio sistemą, naudokite didelius vandens kiekius.. Mėginių užteršimas bakterijomis arba juose esantys imuniniai kompleksai, kitos imunoglobulino sankaupos gali sukelti didesnį nespecifinį prisijungimą. Dėl to gali būti gauti neteisingi rezultatai. 6. Šis produktas nustato IgG antikūnus, kurie gali būti limfocitotoksiniai arba ne. 7. Nenumatoma, kad šis produktas nustatytų IgA ar IgM klasės imunoglobulino antikūnus. 8. Šie produktai skirti naudoti su Luminex instrumentais, vadovaujantis gamintojo rekomendacijomis. 9. Visas panaudotas medžiagas šalinkite pagal vietinius reikalavimus. 10. Papildomos informacijos ieškokite medžiagų saugos duomenų lapuose. C. Sandėliavimo instrukcijos 1. Tinkamų sandėliavimo nurodymų ieškokite produkto etiketėse.. LifeScreen Deluxe granulės ir konjugato koncentratas yra JAUTRŪS ŠVIESAI. Įprastas šviesos poveikis turi trukti iki valandų ar trumpiau. D. Gryninimas ar apdorojimas, reikalingas ruošiantis naudoti psl. iš 6 LC100IVDLT Rev. U

3 1. LMCJS konjugato koncentratas. DIL prieš naudojant BŪTINA ATSKIESTI, įpilant 1 jo dalį į 9 dalis praplovimo buferio. Paruoškite atskiestą konjugatą, kiekvieną testavimo šulinėlį pripildydami μl LMCJS su 4 μl praplovimo buferio. Iki naudojimo uždenkite ir (arba) laikykite tamsioje vietoje, kambario temperatūroje (0 4 o C). Nesunaudotą LMCJS dalį laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje.. LMWB praplovimo buferis. Prieš naudojant turi nusistovėti iki kambario temperatūros (0 4 C). E. Nestabilumo indikacijos 1. Pasibaigus tinkamumo naudoti terminui, drumstų sudėtinių dalių arba kontrolinių medžiagų naudoti negalima.. Išmeskite visą nepanaudotą, bet atskiestą ir jau panaudotą teigiamą kontrolinę medžiagą, neigiamą kontrolinę medžiagą ir konjugatą. INSTRUMENTAMS KELIAMI REIKALAVIMAI Luminex instrumentas ( Lifecodes produkto numeris 88800/8880) MĖGINIŲ ĖMIMAS IR PARUOŠIMAS Kraują reikia paimti nenaudojant antikoaguliantų ir taikant aseptinius darbo metodus. Tirti dar šviežią mėginį, kad būtų minimaliai sumažinta neteisingos teigiamos arba neteisingos neigiamos reakcijų tikimybė dėl netinkamo sandėliavimo arbo mėginių užteršimo. Serumą reikia laikyti 8 C temperatūroje ne ilgiau kaip 48 valandas. Jeigu serumas bus laikomas ilgiau kaip 48 valandas, jį reikia užšaldyti ir laikyti - 0 C temperatūroje arba - 80 C ir žemesnėje temperatūroje iki metų. Laboratorijos turi pačios nusistatyti ir patvirtinti ilgesnio kaip metų laikotarpio serumo sandėliavimo metodus. Laikant ar transportuojant serumą, nuo jo turi būti atskirti raudonieji kraujo kūneliai. Venkite pakartotinai užšaldyti serumo mėginius. Nenaudokite mikrobiologiškai užterštų, hemolizuotų, lipeminių arba aukštoje temperatūroje inaktyvuoto serumo mėginių, nes tokių mėginių tyrimo rezultatai gali būti netikslūs. Prieš analizuojant visus mėginius būtina trumpai išmaišyti sūkurinėje maišyklėje (0 sekundžių) ir trumpai centrifugoje (4 minutes rpm greičiu), kad nusėstų medžiagos dalelės, jei tokių yra. PROCEDŪRA A. Pridedamos medžiagos (tikslią informaciją žr. psl., skyriuje REAGENTAI ) ŽLA granulės Neigiamas kontrolinis serumas Konjugato koncentratas Duomenų registravimo lapas Praplovimo buferis Plokštelės formato lapas Teigiamas kontrolinis serumas B. Reikalingos medžiagos, reagentai ir įranga; kurių nėra komplekte (pagal sąrašą arba atitikmuo) µl reguliuojamos pipetės su atitinkamu pipetės antgaliu Rotatorius arba sūkurinė maišyklė su plokštelės adapteriu 0 µl daugiakanalės pipetės su atitinkamu pipetės antgaliu ir buferio pratekėjimo anga psl. iš 6 Millipore plokštelės su daugiaekraniais filtrais (kat. numeris Nr. MSBVN 110, Lifecodes kat. Nr. 8886) 1,,0 ml mikrocentrifuginiai vamzdeliai Lipnūs plokštelės sandarikliai ( Lifecodes kat. Nr ) Tyrimo mėgintuvėliai, skirti pacientui ir kontroliniams mėginiams Laikrodis Žymeklis Distiliuotas vanduo Mikrocentrifuga Daugiaekranis vakuuminis kolektorius ( Millipore kat. Nr. MAVM 0960R, Qiagen kat. Nr. 1904, Lifecodes kat. Nr. 8881) Luminex Sheath Fluid ( Luminex pernešimo terpė) (1 x ar 0 x Lifecodes 6800, 680) Luminex kalibravimo granulės (KAL 1, KAL, CON 1, CON ; atitinkami Lifecodes kat. numeriai , 68007, ir 68009) NAUDOJIMO NURODYMAI ATSARGUMO PRIEMONĖS Stenkitės neužteršti praplovimo buferio ir konjugato koncentrato (prieš žmogaus IgG) reagento. Dėl neapdairaus šių reagentų užteršimo žmogaus serumu bus neutralizuoti prieš žmogaus IgG ir tyrimas nepavyks. Būtina kontroliuoti vakuuminio kolektoriaus stiprumą. Dėl per didelio vakuuminio kolektoriaus slėgio prie membranos gali prilipti granulės ir dėl to sumažėti jų skaičius. Pipete lašindami į filtro plokštelę elkitės atsargiai. Antgaliu nepalieskite membranos. Membraną palietus pipetės antgaliu, galima ją pradurti ir dėl to analizė gali nepavykti. Elkitės atsargiai ir inkubacijos veiksmų metu užtikrinkite, kad granulės neišsitaškytų ir neprikibtų prie šulinėlio šonų. Analizę atlikdami pirmą kartą, apdorokite kelias teigiamas ir (arba) neigiamas kontrolines medžiagas optimaliam rotacinės platformos arba sūkurinės maišyklės greičiui nustatyti. Nustatyta, kad dirbant su kai kuriais instrumentais veiksmingas greitis yra maždaug 00 apsukų per minutę. Jei nuplovus išlieka žymus neprisijungusių antikūnų kiekis, dėl serumo pertekliaus arba prasto praplovimo gali sumažėti testo veiksmingumas nustatant IgG prisijungimą prie įjautrintų granulių. Dėl šios priežasties gali būti gauti neteisingi rezultatai. Kiekvieno tyrimo atveju reikia panaudoti teigiamą ir neigiamą kontrolinio serumo mėginius, kad būtų galima nustatyti, ar įvyko techninė klaida, ar nesureagavo reagentas. LC100IVDLT Rev. U

4 Nemaišykite skirtingų partijų sudėtinių dalių. Tyrimo procedūra 1. Kitas sudėtines dalis laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje, kol jų prireiks; naudojamas praplovimo buferis turi būti kambario temperatūros (0 4 C). Tuomet, naudodami plokštelės formato lapą, kiekvienam tirtinam serumo ir kontroliniam mėginiui plokštelėje paskirkite poziciją. Rinkinyje esantis kontrolinis serumas yra skirtas plataus spektro teigiamai serumo reakcijai ir neigiamai serumo reakcijai paaiškinti.. Tuščius filtro plokštelės šulinėlius uždenkite lipniais plastikiniais dangteliais. Naudotinus šulinėlius iš anksto pripildykite µl distiliuoto vandens. Po minučių atsargiai išsiurbkite vandenį vakuuminiu kolektoriumi. (Teisingo naudojimo nurodymų ieškokite gamintojo rekomendacijose.). Paruoškite ŽLA granules, trumpai (0 sekundžių) x g greičiu centrifuguodami buteliuką, kad nuo dangtelio ir buteliuko sienelių būtų pašalintos visos granulės. Sūkurinėje maišyklėje granules visiškai resuspenduokite (~ 1 minutę). 4. Į kiekvieną filtro plokštelės testo šulinėlį pripildykite 40 µl praplovimo buferio, po to supilkite 1, µl paciento serumo arba kontrolinio serumo ir išmaišykite.. Į kiekvieną paskirtą šulinėlį įpilkite µl ŽLA granulių. ŽLA granulių buteliuką kas minutes maišykite sūkurinėje maišyklėje, kad paskirstymo metu granulės būtų suspenduotos (pakibtų skystyje). ATSARGUMO PRIEMONĖ: labai svarbu resuspenduoti granules, taip užtikrinant, kad į šulinėlius supilamas pakankamas alikvotinių dalių kiekis ir granulių yra ne per mažai. Jei granulės protarpiais nebus išmaišomos, jos nusės į mėgintuvėlio dugną. Dėl šios priežasties į šulinėlius bus paskirstytas skirtingas granulių kiekis; tai gali nepalankiai paveikti apdorojimo laiką ir rezultatų analizę. 6. Plokštelei nuo šviesos apsaugoti uždenkite ją lipniu plastikiniu dangteliu, po to folija arba įdėkite į dėžutę. Inkubuokite 0 minučių kambario temperatūroje (0 4 C), tamsoje, naudodami rotatoriaus platformą (00 apsukų per minutę). Nepanaudotą kontrolinio serumo dalį bei granules laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje. 7. Konjugatą atskieskite praplovimo buferiu ir laikykite tamsioje vietoje (kiekvienam mėginiui naudokite µl konjugato ir 4 µl praplovimo buferio). Nuo pipetės nuvarvėjusiam skysčio kiekiui kompensuoti rekomenduojama paruošti vieną (1) papildomą konjugato normą. Iki naudojimo uždenkite ir (arba) laikykite tamsioje vietoje, kambario temperatūroje. Nesunaudotą konjugato koncentratą laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje. 8. Po 0 minučių inkubacijos nuimkite lipnų plastikinį dangtelį ir kiekvieną šulinėlį pripildykite 100 µl praplovimo buferio. Išmaišykite patapšnodami plokštelės šoną ir atsargiai išsiurbkite plokštelės turinį. ATSARGUMO PRIEMONĖ: dėl per didelio vakuuminio kolektoriaus slėgio granulės gali prilipti prie membranos ir dėl to nepavykti mėginio tyrimas. Taikykite minimaliausią vakuuminio kolektoriaus spaudimą, kurio reikia mėginiams išsiurbti. 9. Kiekvieną šulinėlį pripildykite 0 µl praplovimo buferio, išsiurbkite. Pakartokite veiksmą dar du kartus. Iš viso reikia praplauti tris kartus. ATSARGUMO PRIEMONĖ: ne visiškai nuplovus gali sumažėti testo veiksmingumas nustatant IgG prisijungimą prie įjautrintų granulių. Dėl šios priežasties gali būti gauti neteisingi rezultatai. 10. Kiekvieną šulinėlį pripildykite 0 µl konjugato. Norėdami apsaugoti nuo šviesos, uždenkite plokštelę folija arba įdėkite į dėžutę. Padėkite ant rotatoriaus platformos (nustatykite 00 apsukų per minutę) arba kas 10 minučių atsargiai išmaišykite sūkurinėje maišyklėje. Inkubuokite 0 minučių kambario temperatūroje (0 4 C). 11. Naudodami švarų pipetės antgalį, kiekvieną šulinėlį pripildykite 10 µl praplovimo buferio. Išmaišykite, kad būtų resuspenduotos granulės. 1. Duomenis kaupkite Luminex instrumentu, vadovaudamiesi gamintojo rekomendacijomis. Delsiant ilgiau kaip valandas, galima padidinti neteisingos teigiamos arba neteisingos neigiamos reakcijų tikimybę. Nepanaudotą konjugato koncentratą laikykite tamsioje vietoje, 8 C temperatūroje. KOKYBĖS KONTROLĖ LMX tyrimo kokybės kontrolė vykdoma testo sistemą papildant keturiomis kontrolinėmis granulėmis, (viena teigiama ir trimis neigiamomis kontrolinėmis granulėmis). Neigiamos kontrolinės (CON) granulės matuoja testo foną ir normalizuoja ŽLA granulių signalą. Šios granulės turi rodyti mažas MFI reikšmes. Numatomų neigiamų kontrolinių granulių reikšmių ribų ieškokite specifinės partijos duomenų registravimo lape. Duomenys, viršijantys numatomas ribas, turi būti atidžiai išnagrinėti. Teigiamos kontrolinės granulės [Probe 77] yra konjuguotos su žmogaus IgG, kurių reikšmė su teigiamos kontrolės serumu arba neigiamos kontrolės serumu turi būti > 10,000. Jei naudojant kontrolinį serumą gaunamos mažesnės kaip 10,000 MFI reikšmės, gali būti, kad testas buvo nepakankamai nuplautas arba buvo sugadintas konjugatas. Paciento mėginiai rodo plataus diapazono reaktyvumą su teigiamos kontrolės granulėmis (zondu 77), tačiau turėtų parodyti > 00 MFI signalą. Jei trūksta serumo, zondo 77 signalas bus stiprus, o likusiųjų granulių vidurkis bus maždaug 0 MFI arba mažesnis. Jei mėginys parodys panašias mažas reikšmes, reiškia, kad per neapsižiūrėjimą galėjote praleisti mėginį. Tokių mėginių apdorojimą reikia kartoti. Teigiamas ir neigiamas serumai yra tiekiami kartu su kiekvienu rinkiniu, jie yra skirti papildomai bandymo kontrolei ir turi būti naudojami kiekvienoje bandymų procedūroje. Naudojant teigiamos kontrolės serumą zondui I-01 ir zondui II-0 turi būti gaunamas teigiamas rezultatas. Naudojant neigiamos kontrolės serumą visoms granulėms turi būti gaunamas neigiamas rezultatas. 4 psl. iš 6 LC100IVDLT Rev. U

5 Analizę reikia atlikti pagal rekomendacijas, nurodytas pakuotės informaciniame lapelyje, taip pat, kaip ir atliekant bet kokias kitas kokybės kontrolės procedūras, vadovaujantis vietos, valstijos, federaliniais ir (arba) akredituotųjų įstaigų reikalavimais. REZULTATAI Norėdami nustatyti, ar testo mėginys yra teigiamas I klasės arba II klasės ŽLA specifiniams antikūnams, pirmiausia įvertinkite kiekvieną atskirą ŽLA granulę siekdami nustatyti, ar ji yra teigiama, ar neigiama IgG antikūnams. Norėdami nustatyti, ar ŽLA granulė yra teigiama, pirmiausia padalinkite granulės medianą MFI iš kiekvienos neigiamos kontrolinės granulės MFI (CON1, CON, CON). Iš šių dalmenų atimkite atitinkamos granulės / CON kombinacijos foninį pataisos faktorių (BAF). BAF yra iš anksto nustatytas kiekvienos granulės / CON kombinacijos MFI santykis, skirtas foniniams trikdžiams, atsirandantiems dėl granulių pakitimų, kompensuoti. BAF reikšmių ieškokite rinkinyje pateikiamame specifinės partijos duomenų registravimo lape. Pavyzdys: Atskiros granulės MFI - (BAF) = Pakoreguotas santykis 1 Neigiama kontrolinė granulė 1 (CON1) MFI Atskiros granulės MFI - (BAF) = Pakoreguotas santykis Neigiama kontrolinė granulė (CON) MFI Atskiros granulės MFI - (BAF) = Pakoreguotas santykis Neigiama kontrolinė granulė (CON) MFI Bet kurio iš šių skaičiavimų PROBE I-01 ir PROBE II-01 teigiama reikšmė rodo teigiamą granulės reakciją. Visų likusių granulių bet kurio iš šių skaičiavimų teigiama reikšmė rodo teigiamą granulės reakciją. Neigiama visų trijų skaičiavimų reikšmė rodo neigiamą reakciją. Tyrimo mėginio vertinimas Mėginys laikomas teigiamu I klasės ŽLA specifiniams antikūnams, jei bent viena iš septinių (7) I klasės ŽLA granulių yra teigiama. Mėginys laikomas teigiamu II klasės ŽLA specifiniams antikūnams, jei bent viena iš penkių () II klasės ŽLA granulių yra teigiama. Mėginys yra laikomas neigiamu ŽLA specifiniams IgG antikūnams, jei visos ŽLA granulės nustatomos kaip neigiamos. PROCEDŪROS APRIBOJIMAI Priimant klinikinius sprendimus negalima remtis tik šio testo rezultatais. Neteisingi rezultatai gali būti gauti dėl tyrimų medžiagos bakterinio užteršimo, netinkamo inkubacijos laiko, nepakankamo granulių praplovimo, atsitiktinio šviesos poveikio konjugatui, nepanaudotų tyrimo reagentų ar praleistų veiksmų. Paciento mėginiuose esant imuninių kompleksų ar kitų imunoglobulino sankaupų, paciento mėginyje gali padaugėti nespecifinių prisijungimų. Dėl to bus gauti neteisingi šio tyrimo rezultatai. Šis produktas nustato IgG antikūnus, kurie gali būti limfocitotoksiniai arba ne. Nustatyti antikūnai yra tokie, kurie reaguoja su turimų antigenų populiacija, išvardinta duomenų registravimo lape. Galimybė aptikti (IgG) antikūnį priklauso nuo antikūnio panašumo, titro ir ant granulės esančio tikslinio epitopo santykinio dažnio. Žemo panašumo lygio ir (arba) žemo titro antikūniai (IgG), būdingi žemo dažnio epitopams, naudojant Liefecodes LifeScreen Deluxe bandinį gali būti neaptikti. LifeScreen Deluxe yra sudarytas iš unikalių Luminex granulių, prie kurių konjuguojami išgryninti ŽLA I klasės ir ŽLA II klasės glikobaltymai. Išgryninti ŽLA klasės I glikobaltymai, skirti PROBE I-01, buvo gauti iš 100 baltaodžių, 100 afroamerikiečių ir 100 Lotynų Amerikos ispanų trombocitų donorų. ŽLA I glikobaltymai išgryninti iš EBV (Epšteino ir Baro viruso) transformuotų B limfocitų ir prisijungusių prie PROBE I-0 per I-07. Jie nurodyti specifinės partijos duomenų registravimo lape. Išgryninti ŽLA klasės II glikobaltymai, skirti PROBE II- 01, naudojami produktų, gautų iš EBV (Epšteino ir Baro viruso) transformuotų B limfocitų, gamybai, reiškia šiuos ŽLA II klasės antigenus: DR1, DR4, DR7, DR8, DR9, DR10, DR11, DR1, DR1, DR14, DR1, DR16, DR17, DR18, DR10, DR1, DR, ir DR. ŽLA II glikobaltymai išgryninti iš EBV (Epšteino ir Baro viruso) transformuotų B limfocitų ir prisijungusių prie PROBE II-0 per II-0. Jie nurodyti specifinės partijos duomenų registravimo lape. Bandinio antikūnio reagavimo potencialui nustatyti būtina turėti bent vieną teigiamą granulę. Kiekvienos granulės reagavimo potencialui nustatyti reikia pasiekti minimalų teigiamų pakoreguotų santykių skaičių. Kai kurių mėginių atveju galimos ribines reikšmes atitinkančios arba joms artimos pakoreguotų santykių reikšmės ir vienos teigiamos pakoreguotos santykių reikšmės pagrindu priskirtas teigiamas reakcijos potencialas. Todėl naudojant Lifecodes LifeScreen Deluxe bandinį antikūnių reakcijos potencialui mėginyje nustatyti būtina įvertinti visų granulių rezultatus, kiekvienai granulei būtinų teigiamų pakoreguotų santykių reikšmių skaičių ir kiekvienai granulei gaunamų visų trijų pakoreguotų santykių reikšmių atitikimą ar artumą ribinei reikšmei. Dėl sudėtingo ŽLA tyrimo pobūdžio duomenis ir tipavimo vertinimus turi peržiūrėti kvalifikuoti darbuotojai. Paciento sveikatos istorijos žinios, kaip ir kryžminės reakcijos grupių supratimas, gali būti naudingas tam tikro antikūno reaktyvumą priskiriant specifiniam serumui. KLAIDŲ APTIKIMAS PROBLEMA GALIMA PRIEŽASTIS SPRENDIMAS Mažas granulių skaičius Negerai suspenduotas granulių mišinys. Naudokite sūkurinės maišyklės plakimo režimą ir resuspenduokite. Instrumentų gedimai nesukalibruoti. Žr. instrumento naudojimo vadovą. Instrumentų gedimai užblokuotas mėginio tėkmės Žr. instrumento naudojimo vadovą. kanalas. Išblukintos granulės. Naudokite naują rinkinį. psl. iš 6 LC100IVDLT Rev. U

6 Viršyta kontrolinio mėginio slenkstinė reikšmė Negauta teigiamo kontrolinio mėginio slenkstinė reikšmė Per stiprus vakuuminio kolektoriaus slėgis / prie membranos prilipusios granulės. Prastas praplovimas. Prasta mėginio kokybė. Išblukintas konjugatas. Prastas praplovimas. Sumažinkite vakuuminio kolektoriaus stiprumą. Pakartoti ir stebėti praplovimą. Iš naujo paimti mėginį. Naudokite naują rinkinį. Pakartoti ir stebėti praplovimus. SPECIFINĖS ATLIKIMO CHARAKTERISTIKOS Pagal aprašytą procedūrą naudojamų LIFECODES LifeScreen Deluxe rinkinių testo rezultatai parodo, ar yra ŽLA IgG antikūnų, ar jų nėra. Nustatant ŽLA I klasės specifinius antikūnus, LifeScreen Deluxe rinkiniai parodė 100 % bendrąjį teigiamumą (97,6 100 %), 91 % bendrąjį neigiamumą (87, 94,1 %) ir 9 % atitikimą, 417 įvertintų serumo mėginių rezultatai palyginti su LifeScreen metodu gautais rezultatais (9 % pasikliauties ribos). Nustatant HLA II klasės specifinius antikūnus, LifeScreen Deluxe rinkiniai parodė 100 % bendrąjį teigiamumą (97,8 100 %), 9% bendrąjį neigiamumą (89,-9,8 %) ir 96% atitikimą, 47 įvertintų serumo mėginių rezultatai palyginti su LifeScreen metodu gautais rezultatais (9 % pasikliauties ribos). Laboratoriniais tyrimais buvo nustatyta, kad šie reagentai netrukdo LIFECODES LifeScreen Deluxe : Remicade (gamintojas Centocor ), Rituxin (gamintojas Genentech ), Zenapax (gamintojas Roche ), Campath (gamintojas Genzyme) ir Gammaguard (gamintojas Baxter). Priešingai, naudojant Thymoglobulin (gamintojas Genzyme ) buvo gauti neteisingi teigiami rezultatai. Ištyrus mėginius, kurių sudėtyje yra Thymoglobulin, gali būti gauti neteisingi rezultatai. INFORMACINĖS NUORODOS 1. Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 000; 4:70 and 4:78.. Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. and London. 000;.. Rodey, GE. HLA Beyond Tears ( nd Edition). DeNovo, Inc. Durango, CO. 000; McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies after Solid Organ Transplantation. Transplantation 000; 69:19. ĮGALIOTASIS ATSTOVAS Įgaliotasis atstovas: Immucor Medizinische Diagnostik GmbH, Robert-Bosch-Straße D-60 Dreieich, Vokietija Telefonas: +49 (0) , faksas: +49 (0) Techninės priežiūros paslaugos Europoje: telefonas +/ Leidinys: psl. iš 6 LC100IVDLT Rev. U